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产品名称:重组小鼠干扰素-γ,His标签(IFN-γ)

产品特点:重组小鼠干扰素-γ,His标签(IFN-γ)的相关产品:Endostatin 内皮抑素/内皮他丁抗原 0.5mgEndostatin 内皮抑素/内皮他丁抗原
CXCL12 Protein Human 重组人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a, His 标签)
ACVR1B重组大鼠 ACVR1B / ALK-4 蛋白 (Fc 标签)

产品型号:

更新日期:2024-11-19

访问次数:51

重组小鼠干扰素-γ,His标签(IFN-γ)的详细资料:

产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断
商品属性:

产品英文名称:Mouse IFN-γ protein, His Tag

产品中文名称:重组小鼠干扰素-γ,His标签(IFN-γ)

规格:20 μg/500 μg/100 μg

货号:EY-01X8614
用途:仅供科研研究实验

特点&优势:

分子:IFN-γ

标签N-His

表达宿主:大肠杆菌

种属:小鼠

序列:氨基酸序列来源于:鼠源 γ-IFN   (NP_P01580) (His23-Cys155)表达的蛋白片段,N端含有6xHis标签。

活性:检测其与配体的结合能力,检测的实验类型为功能性ELISA1 μg/mL的包被小鼠IFN-γ蛋白(100 μl/)可与小鼠IFNGR1结合,小鼠IFNGR1EC50144ng/mL

蛋白长度:重组小鼠 IFN-γ由154个氨基酸组成,预测的理论分子量为16.9 KDa,与SDS-PAGE结动겸动

背景

干扰素(IFN)是一种广谱抗病毒剂,并不直接杀伤或抑制病毒,而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制乙肝病毒的复制,其类型分为三类,α-(白细胞)型、 β-(成纤维细胞)型,γ-(淋巴细胞)型;同时还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力,从而起到免疫调节作用,并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性:蛋白质(主要是糖蛋白),是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长,以及分化、调节免疫功能等多种生物活性:

重组小鼠干扰素-γ,His标签(IFN-γ)

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
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操作步骤:

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。


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