产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Human TPO protein

产品中文名称：重组人促血小板生成素（TPO）

规格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

货号：EY-01X8678
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

标签:无标签

表达宿主:大肠杆菌

种属:人

序列:氨基酸序列来源于人源：TPO（Ser22-Leu195）（NP_000451.1）表达的蛋白片段，N-端带有 6×His 标记。

蛋白长度：该蛋白质的计算分子量为 19.6 kDa，在还原条件下，蛋白质迁移为 20 kDa（SDS-PAGE 分析）。

纯度:> 95 % ，使用SDS-PAGE检测

采用 LAL 法检测，每 1 μg 蛋白质中的 EU 含量小于 0.01。

产品形式:该蛋白质是由 0.2 µm 过滤溶液冻干而成，含 1X PBS，pH 7.动겸动

背景

促血小板生成素（TPO）是一种糖蛋白，由肝脏、肾脏、骨髓基质和其他一些组织产生。血液中的 TPO 水平大多与血小板和骨髓巨核细胞的丰度呈负相关，但多种炎症或感染状态、肝功能衰竭和血液学紊乱都会导致该激素的循环水平意外偏高或偏低。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

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