1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。
柚皮素英文名称：Naringenin：480-41-1分子式：272.25278
羽扇豆醇英文名称：Lupeol：545-47-1分子式：426.7174
鸢尾苷元磺酸钠英文名称：Tectorigenin sodium sulfonate：548-77-6分子式：300.26
原花青素英文名称：Primary anthocyanin：4852-22-6分子式：594.52
α-香附酮英文名称：A-cyperone：473-08-5分子式：218.33458
槲皮苷英文名称：Quercitrin：522-12-3分子式：448.3769
西贝碱英文名称：Sipeimine：61825-98-7分子式：429.64
西红花苷Ⅱ英文名称：Crocin II：55750-84-0分子式：814.82
西红花苷I英文名称：Crocin I：94238-00-3分子式：976.96456
仙茅苷英文名称：Cents a：85643-19-2分子式：466.44
相思豆碱 英文名称：Acacia base：21339-55-9分子式：218.25
香蒲新苷英文名称：Typhaneoside：104472-68-6分子式：770.68528