小鼠肝星状细胞永生化细胞专用培养基操作步骤

** 细胞传代与冻存**

当细胞密度达到80%-90%时即可进行传代。弃去旧培养基，用预热的PBS轻柔洗涤两次，加入0.25%（含EDTA）消化1-2分钟。镜下观察细胞变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化，轻柔吹打形成单细胞悬液。离心（1000rpm, 5分钟）后弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，按1:2至1:3比例分瓶培养。

**质量控制要点**

* **形态观察：** 永生化肝星状细胞应呈现长梭形或多角形，胞质丰富，核仁明显。若出现细胞变圆、脱落或大量空泡，提示培养条件异常。

* **生长曲线：** 定期绘制生长曲线，监测细胞增殖速率。异常增殖或停滞可能表明培养基失效或细胞污染。

* **功能验证：** 建议定期通过α-SMA免疫荧光染色或胶原分泌检测验证细胞活化状态，确保其保持星状细胞特性。

**7. 注意事项**

* **无菌操作：** 所有操作需在超净台中进行，避免污染。

* **培养基保存：** 培养基4℃保存不超过2周，避免反复冻融。

* **细胞状态：** 永生化细胞虽可长期培养，但建议定期更换新鲜冻存细胞，避免遗传漂变。

* **实验记录：** 详细记录培养基批次、细胞代数和实验条件，确保实验可重复性。

**8. 常见问题与解决方案**

* **细胞贴壁不良：** 检查培养瓶是否经过包被，或增加血清浓度至15%。

* **增殖缓慢：** 确认培养基新鲜度，或尝试添加2mM L。

* **污染处理：** 立即丢弃污染细胞，消毒培养环境，启用新批次培养基。

（注：具体操作参数可根据实验室条件和细胞株特性进行优化。）

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