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如何设置豹源性成分探针法PCR荧光定量试剂盒
点击次数：3 更新时间：2026-08-18
结合该试剂盒仅用于科研场景的背景，以下是豹源性成分探针法荧光定量PCR的完整设置流程：
一、20μL反应体系设置
组分添加顺序：按无酶水→缓冲液→dNTP→引物探针→模板→Taq酶的顺序加样，降低酶失活概率。
预混液配制：多样本实验先配制Master Mix预混液，分装后再加对应模板，减少加样误差。
体系质控：加样后轻弹管底混匀，3000rpm短暂离心10秒，排除管内气泡。
二、仪器程序设置
基础扩增循环：95℃预变性3分钟；95℃变性10秒，55-60℃退火延伸30秒，共设置40个循环。
荧光采集设置：在退火延伸阶段采集FAM通道荧光信号，Passive Reference选择None模式适配多数国产仪器。
实验属性配置：在仪器软件中新建实验，设置实验类型为绝对定量/定性检测，标记对应样本孔位与标准曲线梯度。
三、对照体系设置
定量实验需设置6个梯度的标准曲线孔、PCR阴性对照孔、样本制备阴阳对照孔。
定性实验仅需保留1个阳性对照梯度孔，其余对照体系保持不变。
四、设置后校验
确认所有管盖盖紧，程序参数核对无误后，将PCR管放入仪器样品槽，启动扩增运行。