【中文名称】：NADPH-细胞色素还原酶（NCR）试剂盒
【产品规格】：96T/48T。
【保存条件】：2-8℃低温保存
【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供批次。
本试剂盒采用分光光度法检测NCR酶活性，适用于动物肝脏、细胞微粒体等样本，仅用于科研实验，不可用于临床诊断。正式测定前建议选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确认体系适配性。
检测原理
NCR催化NADPH还原氧化型，生成的还原型在550nm处有特征吸收峰，通过测定550nm波长下2分钟内吸光度的增加速率，即可精准计算出样本中NCR的酶活性。
粗酶液（微粒体）提取步骤
全程冰上操作，避免酶活性失活：
称取约0.5g新鲜组织，加入4℃预冷的1mL试剂一，冰上充分研磨成匀浆。
10000g 4℃离心30min，取上清液转移至超速离心管中，弃去细胞核、线粒体等沉淀杂质。
超速离心机中100000g 4℃离心60min，弃去全部上清液，得到粗制微粒体沉淀。
向沉淀中加入1mL试剂一，充分震荡溶解后，100000g 4℃离心30min，弃上清，去除血红蛋白等杂质。
向最终沉淀中加入0.5mL试剂二，充分震荡溶解，得到的微粒体悬液即为待测粗酶液，4℃暂存待测。
正式测定操作
仪器预热：分光光度计/酶标仪提前预热30min，调节波长至550nm，用蒸馏水调零。
空白管设置（仅需做1次）：
比色皿体系：依次加入50μL蒸馏水、900μL预热后的试剂二、50μL试剂三、10μL试剂四，迅速混匀。
96孔板体系：依次加入10μL蒸馏水、180μL预热后的试剂二、10μL试剂三、10μL试剂四，迅速混匀。
记录第10s吸光值A1和第130s吸光值A2，计算△A空白管=A2-A1。
测定管设置：
比色皿体系：依次加入50μL粗酶液、900μL预热后的试剂二、50μL试剂三、10μL试剂四，迅速混匀。
96孔板体系：依次加入10μL粗酶液、180μL预热后的试剂二、10μL试剂三、10μL试剂四，迅速混匀。
记录第10s吸光值A3和第130s吸光值A4，计算△A测定管=A4-A3。
酶活性计算公式
微量石英比色皿体系
按蛋白浓度计算：NCR活性(nmol/min/mg prot) = 550 × (△A测定管 - △A空白管) ÷ Cpr
按样本鲜重计算：NCR活性(nmol/min/g 鲜重) = 275 × (△A测定管 - △A空白管) ÷ W
96孔板体系
按蛋白浓度计算：NCR活性(nmol/min/mg prot) = 1100 × (△A测定管 - △A空白管) ÷ Cpr
按样本鲜重计算：NCR活性(nmol/min/g 鲜重) = 550 × (△A测定管 - △A空白管) ÷ W
注：Cpr为粗酶液的蛋白浓度（mg/mL），W为样本鲜重质量（g）
关键注意事项
超速离心步骤是实验核心，转速不足会导致微粒体提取，酶活性结果显著偏低。
试剂三、试剂四必须临用前新鲜配制，剩余未用完的试剂4℃保存不超过2天。
所有操作全程冰浴，避免NCR酶活性受热失活，影响最终检测结果。
样本中血红蛋白残留会直接干扰550nm波长读数，必须严格执行二次超速离心除杂步骤。