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庚肝抗体IgM检测试剂盒在被冷冻后使用会有影响吗?
点击次数:116 发布时间:2021-12-22
  由于庚肝抗体IgM检测试剂盒保存的特殊性,使得不少的操作者对冷冻后的产品产生了疑问:ELISA检测试剂盒被冷冻后再使用有影响吗?对此,我司ELISA检测试剂盒技术员建议ELISA试剂盒解冻后一次用完,并作出解释:
  ELISA检测试剂盒的保质期一般都是在一年,如果保存得当的话,不会出现问题的。但不要反复冻融。当然如果是正常的ELISA试剂盒,应该放在4℃左右冰箱保存。
  但要注意的是,如果将试剂盒刚从冰箱里面拿出来就立即使用的话,可能会影响,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。建议:先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再进行测定,以使试剂盒在ELISA检测试剂盒使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。
  已开封或者使用后,剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,ELISA检测试剂盒开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,避免潮湿。
  庚肝抗体IgM检测试剂盒操作步骤
  1.包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):
  将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)。
  2.封闭酶标反应孔:
  5%小牛血清置37℃封闭40min,封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min。
  洗涤方法:吸干孔内反应液,将洗涤液注满板孔,放置2min略作摇动,吸干孔内液,倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤次数3次
  3.加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):
  检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl。
  将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min。
  4.加入酶标抗体:
  酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行,37℃,30-60min之间,短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前。
  5.加入底物液(现用现配):
  TMB-过氧化氢尿素溶液,OPD-过氧化氢底物液系统次之。
  底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟,加入终止液显色。
  6.终止反应:
  每孔加入终止液50μl终止反应,于20min内测定实验结果。
  7.结果判断:
  庚肝抗体IgM检测试剂盒OPD显色后采用492nm波长,TMB反应产物检测需要450nm波长。检测时一定要首先进行空白孔系统调零,用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示,当P/N大于2时作为抗体的效价。(数值的大小依具体检测要求而定)
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